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更新時間：2025-03-06
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多重免疫組化染色實驗步驟
樣本準備：包括石蠟切片、冰凍切片或細胞爬片等的處理，如固定、抗原修復、阻斷內源性過氧化物酶等。
一抗孵育：滴加用抗體稀釋液稀釋好的一抗，在避光濕盒內孵育一定時間。
二抗孵育：洗滌后加入與一抗相應種屬的HRP標記二抗，避光室溫孵育。
TSA熒光染料染色：滴加酪胺熒光染料，室溫反應一段時間后洗滌。
抗體洗脫：采用熱修復或抗體洗脫液等方法洗脫前一輪的抗體，以便進行下一輪標記。
重復標記：重復上述步驟，使用不同的一抗和熒光染料，實現多重標記。
復染細胞核及封片：用DAPI等核染料復染細胞核，滴加抗熒光淬滅封片劑封片。
鏡檢拍照：在熒光顯微鏡等設備下觀察并采集圖像。
多重免疫組化染色注意事項
抗體選擇與優化：要選擇特異性高、經過驗證的抗體，并優化抗體的濃度和孵育時間等條件。
表位掩蔽問題：注意抗體的染色順序，避免表位掩蔽現象，可通過調整抗體順序或采用其他方法來解決。
實驗對照設置：設置陽性對照和陰性對照，以確保實驗結果的準確性和可靠性。
信號放大倍數的控制：根據具體實驗需求和熒光信號強度，合理選擇是否添加TSA增強劑等手段來控制信號放大倍數。
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